1. tur maçları, 1980-81 türkiye amatör futbol şampiyonası'na katılan toplam 53 takımla oynanmıştır. (adana demirspor amatör takımı, afyon yse kocatepe, ağrıspor, altay amatör takımı, amasyaspor, bozüyükspor, çine madranspor, çorluspor, denizlispor amatör takımı, gölcükspor, artvin hopaspor, kahramanmaraş gençlik, kayserispor amatör takımı, mardin sağlıkspor, sümer soyaspor, tokatspor amatör takımı, urfa kendirgücü kulüpleri kura sonucu üst tura yükseldiler.)
